Mouse IgG1 (isotype control) Magnetic Beads

Mouse IgG1 (isotype control) Magnetic Beads

产品包装:

产品描述:

Mouse IgG1 (isotype control)免疫磁珠采用Recombinant Mouse IgG1 protein [PSH04-91],与粒径为10–37 μm的琼脂糖磁珠通过共价偶联方式制备而成。

Mouse IgG1 (isotype control)免疫磁珠适用于常规免疫沉淀实验,可用于检测与mouse IgG1发生非特异性结合的蛋白复合物,常作为Anti-Myc tag免疫磁珠(货号:HAK21044)或Anti-DYKDDDDK免疫磁珠(货号:HAK21011)的阴性对照。该产品基于磁性吸附原理,可实现快速、高效的分离,无需离心操作,从而简化实验流程。

产品性能:

产品以悬浮液形式提供,其中Mouse IgG1同型对照免疫磁珠保存于含防腐剂的PBS缓冲液(pH 7.4)中,浓度为20%。

辅助设备:磁力架、离心管。

保存条件:

Mouse IgG1 (isotype control)免疫磁珠采用蓝冰运输,建议在2-8℃条件下储存,有效期为2年。请注意切勿在-20℃下冷冻保存,否则将不可逆地破坏磁珠结构。

注意事项和免责声明

本产品仅限于科学研究使用,不得用于临床诊断或治疗。

使用说明:

一、样品制备

建议将蛋白裂解液的pH值控制在6.0至8.0之间,并将NaCl或KCl浓度调节至不低于0.15 M,以获得较佳实验效果。制备蛋白裂解液后,需进行离心处理(10,000–20,000 × g,15 min),以去除会干扰蛋白结合的细胞碎片及微粒。若需进一步提升实验效果,还可将蛋白裂解液通过0.45 µm或0.22 µm滤器进行过滤。

二、使用 Mouse IgG1 (isotype control)免疫磁珠进行免疫沉淀(IP)实验的阴性对照

以下为单个免疫沉淀(IP)反应的操作示例。若需进行多个IP反应,请根据样品数量按比例增加试剂用量。建议每个IP反应(以1×10^6细胞或500 μL裂解液为例)使用与IP实验中所用的抗体磁珠等体积(通常为10–20 µL)的同型IgG对照磁珠悬浮液。

1.磁珠重悬:轻轻颠倒混匀磁珠悬浮液,确保磁珠均匀分散。取适量体积移入合适的离心管中。为减少对磁珠的损伤,建议剪切移液器吸头末端后再进行吸取。

2.去除储存液:将离心管置于适配的磁力架上,待磁珠完全吸附后,吸除并弃去储存缓冲液。

3.磁珠清洗:加入10倍于磁珠体积的TBS缓冲液,轻柔重悬磁珠,再次置于磁力架上吸附后弃去上清。重复洗涤共3次,注意尽量去除洗涤液,避免磁珠损失。若进行多个IP样本,可合并洗涤所有磁珠,洗涤后重新悬浮于TBS中,再按样本数目均分磁珠。分装后置于磁力架上吸附,弃去TBS。

4.加入裂解液:向洗涤后的磁珠中加入500 µL经预处理的细胞裂解液。

5.敷育结合:在轻柔摇荡(建议使用旋转混匀仪)条件下孵育1小时。为提升结合效率,可延长孵育时间至4℃过夜。

6.去除未结合蛋白液:将离心管置于磁力架上吸附磁珠,使用细长吸头或套接吸头(如1 mL吸头套200 µL吸头)小心吸弃上清,注意避免触及磁珠。

7.洗涤磁珠-蛋白复合物:加入10倍磁珠体积的TBS缓冲液,轻柔重悬磁珠后置于磁力架上吸附,弃去上清。重复该步骤共3次。

8.SDS-PAGE上样缓冲液洗脱(变性洗脱法):

本方法为变性洗脱,所得蛋白样品适用于SDS-PAGE电泳或Western Blot检测。。

8.1使用1× PBS将5× SDS-PAGE上样缓冲液稀释至1×工作浓度。

8.2按每10 µL原始磁珠体积加入50 µL 1× SDS-PAGE上样缓冲液,于95℃加热5–10分钟。

8.3将反应管置于磁力架上至溶液澄清,取上清进行后续SDS-PAGE电泳或Western Blot检测。

四、结果展示