流式细胞术（Flow Cytometry，FC）是一种强大的工具，可应用于免疫学、病毒学、分子生物学和癌症生物学等多个学科。通过检测悬液中的单个细胞或其他生物粒子上所标记的荧光信号，分析每个颗粒的可见光散射和荧光参数，来对单个细胞或生物粒子进行定量分析和分选。
一、相关试剂配方
| 名称 | 配方 |
|---|---|
| 1×PBS | 10 mM PBS，室温放置，有效期7天。 |
| 固定液 | 4% PFA或100%甲醇或80%甲醇，保存于-20°C，有效期12个月。 |
| 细胞储存液 | 含0.1% ProclinTM 300的1×PBS，保存于2~8°C，有效期3个月。 |
| 通透液 | 1×Permeabilization Buffer（eBioscience）或90%甲醇，现配现用。 |
| 封闭液 | 含1% BSA，2.26%甘氨酸，10%阴性山羊血清，0.1% Tween-20和0.05% ProclinTM 300的1×PBS，保存于2~8°C，有效期1个月。 |
二、细胞固定
1)从细胞间获取细胞，在96孔板中，单孔细胞量需要达到5x105~1x106个细胞。将获取的细胞以1500 rpm/min离心5 min，弃上清。
2)加入固定液4% PFA，室温固定15 min。或者加入冰甲醇，固定15 min。
3)移除固定液，1×PBS室温清洗2次，每次5 min。
4)移除1×PBS，加入细胞储存液，保存于2~8°C。
三、通透和封闭
在固定步骤中使用了甲醇等有机溶剂固定液时，无需进行通透这个步骤，注意过度通透会破坏细胞结构并导致信号丢失，需严格把控浓度和时间。
1)加入通透液，室温孵育10 min。
2)移除通透液，加入足量封闭液，室温孵育15 min。
四、抗体孵育
1)根据说明书用1×PBS稀释一抗。
2)封闭后的细胞混匀，转至96孔V型板中，1500 rpm/min离心5 min，弃上清，加入稀释好的一抗，混匀，室温孵育15 min。
3)移除一抗，加入1×PBS，室温清洗1次。
4)移除1×PBS，加入荧光二抗，混匀，室温避光孵育15 min。
5)移除二抗，加入1×PBS室温清洗2次，每次5 min。
6)加入1×PBS重悬细胞，上流式细胞仪检测。
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