流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种对悬浮状态中的单细胞或其他生物颗粒进行高速、多参数定量分析和分选的激光检测技术。其核心原理是通过流体动力学聚焦使细胞在鞘液包裹下形成单细胞流，依次高速通过激光检测区，在瞬时受激后产生散射光与荧光信号，经一系列光学系统收集、滤光及光电转换后，形成可定量分析的数字信号。该技术具备高通量（每秒数千至数万个细胞）、多参数同步检测（可同时分析物理特性及多个荧光标记分子）以及活细胞分选能力，已成为免疫学、肿瘤学、干细胞研究及临床诊断中不可或缺的分析工具。
流式细胞术（FC）操作流程
1.相关试剂配方
透膜缓冲液：
取1mL 10x Permeabilization Buffer（eBioscience）充分混匀于9 mL超纯水中，现配现用。
封闭液：
1）10% 阴性山羊血清：取1 mL阴性山羊血清充分混匀于9 mL 1×PBS中，现配现用。
2）Human IgG：100 μL 10% 阴性山羊血清中加入2 μL Fc Block (130-059-901, 2mL）。
3）2.4G2:100 μL 10% 阴性山羊血清中加入2 μL Fc Block (2.4G2, 0.5 mg/mL)
4）D34-485:100 μL 10% 阴性山羊血清中加入2 μL Fc Block (D34-485, 0.5 mg/mL)
2.细胞胞内染色操作流程
1. 制备单细胞悬液。
2. 1xPBS洗涤2次，加入固定剂；
1） 靶标在胞内时加入4%PFA室温固定15分钟，500g离心5分钟，弃上清；1xPBS洗涤2次，加入透膜缓冲液室温孵育15分钟；
2）靶标在核时加入Transcription Factor Staining Buffers，室温固定30分钟；
3. 1xPBS洗涤2次，500g离心，弃上清。
4. 封闭：加入封闭液（山羊血清），室温封闭15分钟。
5. 加入1xPBS稀释好的抗体，2-8°C孵育30分钟；
6. 加入1xPBS洗涤1—2次500g离心，弃上清。
7. 如非荧光染料直标抗体加入荧光二抗，2-8°C避光孵育30分钟。
8. 加入1xPBS洗涤1—2次，500g离心，弃上清。
9. 加入适量1xPBS重悬细胞，利用流式细胞仪分析细胞。
3.细胞胞外染色操作流程
1. 制备单细胞悬液。
2. 阻断Fc受体，4°C封闭10—20分钟。根据细胞种属选择不同的封闭液。
3. 加入抗体，2-8°C孵育30分钟。
4. 加入1xPBS洗涤2次，500g离心，弃上清。
5. 如非荧光染料直标抗体加入荧光二抗，2-8°C孵育30分钟。
6. 加入1xPBS洗涤2次，500g离心，弃上清。
7. [可选]加入细胞活性染料（如7-AAD）染色细胞；
8. 加入适量1xPBS重悬细胞，利用流式细胞仪分析细胞。
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