虹和CmTSA多重免疫荧光染色试剂盒(套装20T-4C，3Mouse)IRISKitCmTSA Kit

Product Name

虹和CmTSA多重免疫荧光染色试剂盒(套装20T-4C，3Mouse)IRISKitCmTSA Kit

Package Specification

Intended Use

用于实现在同一组织切片上多个靶标蛋白共同染色，从而通过荧光图像分析挖掘组织微环境中的复杂信息，如定量分析、共表达确定细胞分型、空间关系分析等。

Reaction Principle

首先一抗识别目标蛋白抗原表位，继而带有HRP的二抗与一抗结合，加入携带非活性酪胺底物的荧光基团，该荧光基团在HRP和过氧化氢的催化作用下被激活，从而识别目标蛋白上的酪氨酸残基并与之紧密结合，因此在目标蛋白上产生了高密度的共价结合的酪胺标记。在染色完成后，去除非共价结合抗体，再进行下一个抗体染色。该方法不受抗体种属的限制，只需要每轮染色更换不同的酪胺荧光基团来标记不同的抗原，从而实现多重荧光免疫染色。

Storage Condition Validity

4℃保存,有效期6个月。启用后注意保存,切勿污染。若荧光染料的颜色发生变化,即表示失效。

Precautions

1.对于抗体、显色试剂,先使用低速离心机短时间混匀后取用。

2.请提前准备一次性5mL无菌注射器、0.22μm的有机系过滤器备用。

3.请在拿到试剂盒后,及时取出[6-1]、[6-2]、[6-3],根据实验用量所需进行分装,放置于-20℃冰箱冷冻保存。日常使用时请提前取出,恢复至室温后正常使用,常温避光保存不超过3天。

4.实验过程中如果需要暂停实验,可以停留在PBS溶液洗涤步骤,将切片放入PBS溶液中暂存,这种方式适用于在一周内完成的多色免疫荧光实验;如果需要长时间暂停实验,可以使用[#9]封片后放入4℃冰箱储存。

5.提供的[#1]根据说明书比例稀释后,按照抗原修复一次需要200mL,可以做10次抗原修复,请合理安排抗原修复的次数。

6.在实验过程中,为了保证试剂的充分反应和实验的可重复性,请不要在低于20℃的环境温度下进行实验操作。同时,避免切片所处溶液温度的快速升高或者降低,减少对切片的损伤。

7.请严格按照Protocol里面的时间孵育抗体和显色液,长时间的反应会增加非特异着色。

Sample Requirements

1.石蜡切片：

要求使用黏附载玻片，并且保持组织完整、厚薄均匀、无褶皱、无刀痕。

常规切片厚度为3～5μm。短时间可室温（21～25℃保存，长时间可冷藏（2～8℃）保存。

2.冰冻切片：

需冰冻切片的组织应提前经过4%多聚甲醛固定，梯度蔗糖溶液脱水，OCT包埋，再进行切片。

冰冻切片要求使用黏附载玻片，并且保持组织完整、厚薄均匀、无褶皱、无刀痕。

常规切片厚度为8μm。冷冻（-80℃）保存。

3.细胞爬片：

鉴于细胞爬片的特殊性,具体要求和详细操作请见附件:细胞爬片的TSA染色方案。