细胞免疫荧光（IF-cell）
细胞免疫荧光（IF-cell）
免疫荧光（Immunofluorescence，IF）染色是一种广泛应用于生物学研究和临床诊断的技术。利用抗原抗体结合的特异性，使用荧光标记的抗体对细胞靶抗原进行检测，在荧光显微镜下观察其相对丰度和亚细胞定位的实验技术。
一、相关试剂配方
1) 贴壁细胞形态正常且细胞密度达到50%~70%左右，悬浮细胞一般1×106的密度，移除细胞培养液。
2) 1×PBS室温清洗1次。
3) 移除1×PBS，加入固定液4% PFA，室温固定15 min。或者加入冰甲醇，固定3~5 min。
4) 1×PBS室温清洗3次，每次5 min。
三、通透和封闭
在固定步骤中使用了甲醇等有机溶剂固定液时，无需进行通透这个步骤，注意过度通透会破坏细胞结构并导致信号丢失，需严格把控浓度和时间。
1) 加入通透液，室温孵育15 min。
2) 移除通透液，加入1×PBST，室温清洗2次，每次5 min。
3) 加入足量封闭液，室温孵育1h。
四、抗体孵育
1) 根据说明书用抗体稀释液稀释一抗。
2) 移除封闭液，加入稀释好的一抗覆盖细胞，2~8℃孵育过夜。
3) 移除一抗，加入1×PBST，放置水平摇床上，室温清洗3次，每次5 min。
4) 移除PBST，加入荧光二抗，室温避光孵育45 min。
5) 移除二抗，加入1×PBST，放置水平摇床上，室温清洗3次，每次5 min。
6) 用含DAPI的抗荧光淬灭剂封片，避光保存。