多重免疫组化实验指南：如何选择适合的抗体
多重免疫组化(mIHC)技术
多重免疫组化技术(mIHC)的发展揭开了肿瘤这一类型的复杂样本中细胞(群)-细胞(群)之间的相互作用机制，让研究人员对肿瘤微环境的分析有更深入的了解，并且为临床医师、病理医师以及药物开发的人员带来更多的研究动能，相比传统免疫组化(IHC)、二代测序(NGS)技术，mIHC不仅能提供精确的空间定位信息，而且在空间信息基础上原位叠加多维的蛋白表达信息。
华安Huabio助力研究者完成更准确高效的多重免疫组化(mIHC)实验，实现在单张 FFPE 载玻片上对多种免疫标记物进行多重分析，可用于检测组织切片内十数种蛋白质靶标（基于荧光显微镜），因此允许从少量组织样本中收集大量蛋白质的信息，可对肿瘤和基质的原位免疫环境进行高分辨率的定量研究。
华安Huabio助力研究者完成更准确高效的多重免疫组化(mIHC)实验，实现在单张 FFPE 载玻片上对多种免疫标记物进行多重分析，可用于检测组织切片内十数种蛋白质靶标（基于荧光显微镜），因此允许从少量组织样本中收集大量蛋白质的信息，可对肿瘤和基质的原位免疫环境进行高分辨率的定量研究。
多重免疫组化(mIHC)的特点与应用
● 多重免疫组化(mIHC)是由检测单一靶蛋白的标准IHC发展而来的组织检测技术，可以实现在一张切片原位同时检测多个靶标。mIHC技术可谓研究复杂样本如肿瘤微环境的一把利器，可以同时获取组织的肿瘤标记物、细胞状态、免疫细胞分型、免疫调控、间质细胞等信息，对肿瘤微环境特征的全貌进行分析。
● mIHC不仅可以提供类似单细胞组学的高维度丰富信息，更重要的是可以原位分析各要素间的空间联系，肿瘤免疫微环境的博弈判断提供翔实的数据基础，将在个体化医疗和伴随诊断领域发挥越来越重要的作用。
● 基于TSA荧光信号放大技术的 mIHC ，兼容检测不同丰度范围的蛋白质，甚至是那些表达水平较低的蛋白质，是蛋白质共定位的理想工具。
● 多重免疫组化(mIHC)是研究复杂疾病生物学的强大工具，尤其是在临床样本匮乏的情况下。其在同一样品中同时检测多个标记物的能力为药物科学家提供了对药物作用、毒性和耐药性机制前所未有的见解，科学家可以更全面地了解药物如何与组织和细胞相互作用，从而开发出更有效、副作用更少的药物。此外，mIHC还可应用于确定预后和预测癌症标志物；肿瘤浸润淋巴细胞分析；生物标志物定量检测；分析信号通路上、下游分子之间关系；分子分型等。mIHC能够兼容集成至自动染色、全玻片成像和经过验证的图像分析的工作流程对于开发临床相关的体外诊断至关重要。
● mIHC不仅可以提供类似单细胞组学的高维度丰富信息，更重要的是可以原位分析各要素间的空间联系，肿瘤免疫微环境的博弈判断提供翔实的数据基础，将在个体化医疗和伴随诊断领域发挥越来越重要的作用。
● 基于TSA荧光信号放大技术的 mIHC ，兼容检测不同丰度范围的蛋白质，甚至是那些表达水平较低的蛋白质，是蛋白质共定位的理想工具。
● 多重免疫组化(mIHC)是研究复杂疾病生物学的强大工具，尤其是在临床样本匮乏的情况下。其在同一样品中同时检测多个标记物的能力为药物科学家提供了对药物作用、毒性和耐药性机制前所未有的见解，科学家可以更全面地了解药物如何与组织和细胞相互作用，从而开发出更有效、副作用更少的药物。此外，mIHC还可应用于确定预后和预测癌症标志物；肿瘤浸润淋巴细胞分析；生物标志物定量检测；分析信号通路上、下游分子之间关系；分子分型等。mIHC能够兼容集成至自动染色、全玻片成像和经过验证的图像分析的工作流程对于开发临床相关的体外诊断至关重要。
多重实验的抗体选择
无论使用传统单一靶蛋白的标准IHC还是多重免疫组化技术(mIHC)，优质且高度特异性抗体的使用都至关重要，华安生物提供一系列支持mIHC验证的抗体，无论您是多重免疫组化（mIHC）实验的新手，还是想要对目前方法进行确认的有经验的研究人员，都可以信赖华安生物的产品与服务。
适用于多重免疫组化的抗体具有极好的靶点特异性和稳定性，它的优势在于先期严格的普通IHC筛选和多轮mIHC实验验证。Huabio提供经mIHC验证的肿瘤免疫微环境Marker抗体，如下表展示了华安研发的mIHC验证产品 23个，在为您的肿瘤免疫研究提供可靠工具的同时，还提供专业的技术支持与咨询服务。
适用于多重免疫组化的抗体具有极好的靶点特异性和稳定性，它的优势在于先期严格的普通IHC筛选和多轮mIHC实验验证。Huabio提供经mIHC验证的肿瘤免疫微环境Marker抗体，如下表展示了华安研发的mIHC验证产品 23个，在为您的肿瘤免疫研究提供可靠工具的同时，还提供专业的技术支持与咨询服务。
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多重 IHC 染色示例
图B：抗CD20重组兔单抗 [PD00-02] (HA721138)。
图C：抗PD-L1重组兔单抗 [PD01-02] (HA721176)。
图D：抗NCAM/CD56 重组兔单抗 [JF1021] (ET1702-43)。
图E：抗CD3重组兔单抗 [JE80-02] (HA720082)。
图F：DAPI。
使用 HRP 结合的 UltraPolymer 山羊多克隆抗体 HA1119/HA1120 作为二抗。用连续免疫染色试剂盒 (IRISKit™MH010101) 进行染色。使用 Tris-EDTA 缓冲液 (pH 9.0) 在95℃下加热进行抗原修复30分钟。复染：DAPI（蓝色）。
图B：抗CD20重组兔单抗 [PD00-02] (HA721138)。
图C：抗CD68重组鼠单抗 [PDM0-13] (HA601115)。
图D：抗PD-L1重组兔单抗 [PD01-02] (HA721176)。
图E：抗panCK细胞角蛋白重组鼠单抗 [PDH09-10] (HA601138)。
图F：抗CD3重组兔单抗 [JE80-02] (HA720082)。
使用 HRP 结合的 UltraPolymer 山羊多克隆抗体 HA1119/HA1120 作为二抗。用连续免疫染色试剂盒 (IRISKit™MH010101) 进行染色。使用 Tris-EDTA 缓冲液 (pH 9.0) 在95℃下加热进行抗原修复30分钟。复染：DAPI（蓝色）。
华安将为您提供mIHC检测的优化和验证流程
1. 优化每个靶点的单通道mIHC。使用阳性对照组织确定每个靶标的单克隆抗体克隆、抗原修复条件和抗体稀释度。
2. mIHC panel组合。根据靶点蛋白丰度和荧光信号强度测试染色顺序。由于多轮抗原修复会造成一定信号损失，推荐靶点丰度越高，排序越早；对于低丰度的蛋白尽量搭配荧光强度高的荧光素。
3. 测试多重实验方案中的优化染色条件。进行校准实验以确保对于每个靶点信号特异且在mIHC panel上各个靶点信号均衡。
4. 将 mIHC panel检测与其各自经过验证的单重 IHC 检测方法进行比较。将每个经过验证的单重 IHC 染色的连续载玻片与多重染色进行比较。
5. 进行精度测试。作为最后阶段，连续载玻片依次用抗体或 IgG 同种型匹配对照（阴性对照）进行染色。
2. mIHC panel组合。根据靶点蛋白丰度和荧光信号强度测试染色顺序。由于多轮抗原修复会造成一定信号损失，推荐靶点丰度越高，排序越早；对于低丰度的蛋白尽量搭配荧光强度高的荧光素。
3. 测试多重实验方案中的优化染色条件。进行校准实验以确保对于每个靶点信号特异且在mIHC panel上各个靶点信号均衡。
4. 将 mIHC panel检测与其各自经过验证的单重 IHC 检测方法进行比较。将每个经过验证的单重 IHC 染色的连续载玻片与多重染色进行比较。
5. 进行精度测试。作为最后阶段，连续载玻片依次用抗体或 IgG 同种型匹配对照（阴性对照）进行染色。