细胞免疫荧光(ICC)
细胞免疫荧光
免疫荧光（Immunofluorescence，IF）染色是一种广泛应用于生物学研究和临床诊断的技术。IF利用荧光标记抗体检测特异性靶抗原。染色成像非常直观，可以直接观察结果。虽然这是一个成熟的技术，但必须考虑多个因素，并采取各种优化步骤，以确保染色成功。
一、相关试剂配方
1. 1×PBS
2. 1×PBST
取1 mL Tween-20充分混匀于1 L 1×PBS中，室温放置。
3. 0.2% Triton X-100（细胞通透剂）
取0.2 mL Triton X-100充分混匀于100 mL 1×PBS中，室温放置。
4. 封闭液
称取0.5 g BSA，1.128 g甘氨酸，和5 mL阴性山羊血清，0.5 mL Tween-20，1×PBS定容至50 mL。
5. 抗体稀释液
称取0.5 g BSA ，和 0.05 mL Tween-20充分溶解于50 mL 1×PBS 中，2~8°C保存。
二、细胞固定和通透
贴壁细胞
1. 将准备好的贴壁细胞上清吸去，加入4%的多聚甲醛(用1xPBS配制，现配现用)，室温固定15min，或100%冰甲醇（-20℃预冷）固定5min。
2. 吸去固定液，加入1x PBS，洗涤2次，每次5 min。
3. 加入细胞通透剂，室温透膜5-15 min。
4. 用1x PBS洗涤2次，每次5 min。
悬浮细胞
1. 准备5x105-1x106细胞，1000rpm离心3min。
2. 移除上清后，加入1mL 4%的多聚甲醛，室温固定15min，或100%冰甲醇（-20℃预冷）固定5min。
3. 移除上清，加入1 mL 1×PBS，1000 rpm/min离心3 min，重复此步2次。
三、抗体孵育
1. 加入封闭液，室温封闭1h。
2. 加入用抗体稀释液稀释的一抗，放入湿盒4℃过夜。
3. 用1xPBST洗涤3次，每次5min。
4. 加入用抗体稀释液稀释好的荧光二抗，室温避光孵育1h。
5. 用1xPBST洗涤3次，每次5min。
6. 用含有DAPI（如需要）的抗荧光猝灭剂进行封片。
7. 荧光显微镜下观察及拍照。