阅读这份SDS-PAGE电泳小贴士，助你收获完美的WB结果图
十二烷基硫酸钠（SDS）是一种阴离子表面活性剂，能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合形成密度相同的短棒状复合物，不同分子量的蛋白质形成的复合物的长度不同，其长度与蛋白质分子量呈正相关。因此，各种蛋白质 SDS复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，只是分子量的函数。这种电泳方法称为SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。
SDS-PAGE步骤
2）铸造凝胶并准备好设备。
3）将缓冲液加入到凝胶槽中，并将样品/对照品加入到凝胶中。
4）对样品施加电流以分离蛋白质。
5）对凝胶进行染色和可视化。
SDS-PAGE Tips
SDS-PAGE Tips
1.小电压会使胶的分子筛效应得到充分发挥。电压越小，条带越漂亮，浓缩胶55V，分离胶75V就能跑得很好，但是实验的时间会很长。
2.胶的均匀度，胶越均匀，条带越窄，分离越均匀。倒胶之前，一定要充分混匀(不要有气泡)，玻璃板一定要干净，双蒸水隔离时，一定要比较轻地加上去，避免稀释上层的分离胶。
3.大分子量的蛋白建议加大电泳电转的电场强度和加长作用时间，但必须控制温度，保证低温电泳和电转。
4.如果是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂要温和得多，这时最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性；部分膜蛋白不好提取，尤其是亚细胞器的膜蛋白。可考虑最新的invent柱式提取法，提取效率高，蛋白丢失较少。
5.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能将这次的标准曲线留到下次实验使用。
6.有些蛋白质由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（α-胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。有的蛋白质（如：电荷异常或结构异常的蛋白质；带有较大辅基的蛋白质）不能采用该法测相对分子量。
常见问题
常见问题
1. 电泳的条带过粗
主要是浓缩胶的原因。
解决措施：适当增加浓缩胶的长度；保证浓缩胶贮液的pH正确；适当降低电压。
2. 条带呈微笑状 ︶
2. 条带呈微笑状 ︶
解决措施：更换电泳槽。
3. 条带呈倒微笑状 ︵
凝胶左右两头没有凝固好；装置不合适，特别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡。
解决措施：重新制胶。
4. 条带不整齐
4. 条带不整齐
解决措施：
可能是由于胶凝固不均匀，建议待胶完全凝固后上样；
可能是由于电泳的时候，有气泡在胶的下边缘，建议电泳前，检查并赶走胶底部的气泡；
可能是由于上样buffer不是工作液浓度，建议重新配置上样buffer；
可能是由于拔梳子导致样品孔不齐，建议水平缓慢的拔梳子。
5. 出现横竖不齐的条带
解决措施：
（1）提取蛋白的时候要充分超声粉碎，然后高速离心。吸取上清的时候不要触到沉淀。胶里面很有可能有杂质。
（2）遇热膨胀过度，可以在电泳槽里面安放冰槽，电泳液预先降温，同时降低电泳时的电流。还有配琼脂也要用缓冲液，而不是水，不然不导电。接触不好也会引起条带变形。
6. 蛋白条带走到下面逐渐变宽发散
6. 蛋白条带走到下面逐渐变宽发散
多数是因为小分子在胶里的运动不规律，这种情况常发生在高浓度胶或凝固不一致的胶里。
解决措施：可加大阴极的缓冲液浓度，看是否有改善
7. 条带偏斜
电极不平衡或者加样位置偏斜。
解决措施：平衡电极或确保加样位置端正。