实验干货 | WB没有目的条带？点击即看解决方案！
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
当然，努力不能白费，实验也不能白失败，滑动进度条，看看WB实验没有目的条带的常见原因，记住它，下次一定成功！
常见原因
Tips：https://cansarblack.icr.ac.uk/ 这个数据库可以查询细胞系中蛋白表达的丰度。
其次需要考虑到蛋白的定位，针对低丰度的膜蛋白或核蛋白等，可以使用特定的蛋白提取方法对目的蛋白进行富集。选择错误的裂解液会造成样品中无目的蛋白情况，例如目的蛋白为核蛋白时请勿使用 NP40 这类温和的裂解液。排除了目的蛋白本身性质因素后，开始逐步排查其他原因：
1. 一抗二抗是否匹配
解决措施：二抗与一抗种属不匹配，更换二抗；二抗是否有带HRP等标记，如没有，需要更换带标记的二抗或者使用三抗进行再次孵育。
Tips：二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。
2. 样本降解，未添加蛋白酶抑制剂，内参出现明显杂带
解决措施：重新提取蛋白，添加蛋白酶抑制剂，如果是磷酸化蛋白，还需添加磷酸酶抑制剂。
Tips：抑肽酶广泛应用于各种生物学实验（如各种蛋白提取过程），在抑制蛋白酶分解蛋白过程中起到了重要作用。抑肽酶抑制胰蛋白酶、纤溶酶、血浆及组织中血管舒缓素。丝氨酸活性的蛋白酶如纤溶酶及血浆血管舒缓素都起关键作用。抑肽酶通过抑制酶上的丝氨酸活性部分，但是与不同的蛋白酶结合，抑制效果会略有不同。
3. 封闭液选取不当
解决措施：根据具体蛋白特点选取封闭液。
Tips：常用的封闭液有BSA以及脱脂牛奶，有些靶点不适合用牛奶封闭，需要根据具体情况选取封闭液。
4. 蛋白未转到膜上
解决措施：可以用丽春红染膜并结合染胶（考马斯亮蓝）后确定条带是否转至膜上。适当调整转膜的时间和电流。
5. 缓冲液中含有叠氮钠
解决措施：叠氮钠是一种HRP的抑制剂，缓冲液不能使用叠氮钠作为防腐剂。
6. 未根据抗体说明书推荐范围稀释抗体
解决措施：根据抗体说明书推荐范围稀释抗体，若实验样本有富余，可将抗体按不同浓度稀释，做浓度对比实验，找到最合适的稀释比。
Tips：使用太多一抗或二抗可能导致底物迅速耗竭，呈现出很弱的信号。
7. 抗体孵育温度与时间不当
解决措施：调整孵育环境温度与时长，丰度低的靶点，可以考虑4℃孵育过夜。
Tips：同样室温孵育条件，夏天和冬天会有差异。
Tips：同样室温孵育条件，夏天和冬天会有差异。
8. 酶或底物失活
解决措施：在暗室内准备少量的工作液，加入少量的HRP结合物，会观察到绿光。如果未检测到光，底物或HRP结合物均有可能失活。
9. 煮样方式不当
解决措施：不同定位需考虑裂解处理方式的不一样，膜定位可以考虑不煮样方式裂解，跨膜蛋白可以考虑70°煮样的方式处理裂解液。
*当然，如果确定都没有问题，且丰度确实很低的靶标，可以考虑更换超敏ECL检测。