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免疫共沉淀(CoIP)检测服务

实验原理

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP),其原理是当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来, 如果用蛋白质 X 的抗体 anti-X(通常称为 IP抗体)将 X 特异地抓住并沉淀下来,那么与 X蛋白在体内结合的蛋白质 Y 或者 Z 等也能一起被沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对Y 或者 Z蛋白进行检测,进而证明蛋白间的相互作用。目前多用 protein A 或 G 预先固化在琼脂糖或者磁珠 beads 上。

 

实验流程

1. 准备样品:总蛋白提取;

2. 样品裂解液制备以进行免疫印迹分析;

3. 抗体、样品裂解液、protein A+G琼脂糖珠孵育,使抗体与protein A+G琼脂糖珠偶联;

4. 免疫沉淀反应,收集沉淀,洗涤制样;

5. SDS-PAGE, 免疫印迹分析或质谱分析。

 

注意事项

1. 细胞裂解采用温和的裂解条件,多采用非离子变性剂。不能用高浓度的变性剂,细胞裂解液中要加各种酶抑制剂。

2. 使用对照抗体:

单克隆抗体:正常小鼠的IgG或另一类单抗;

兔多克隆抗体:正常兔IgG

 

样品要求

1. 客户提供:蛋白质样品(组织、细胞、蛋白质溶液等)。

2. 用于免疫共沉淀的一抗及目的蛋白的相关信息,其他免疫共沉淀相关信息。

3. 运输要求:干冰包装寄送。

 

报告内容

1. 免疫共沉淀western blot鉴定结果电子图片。

2. 完整的实验步骤。

 

服务价格

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